Molecular investigation of Neorickettsia risticii in trematodes and snails in a region with serological evidence of this agent in horses, state of Rio de Janeiro / Pesquisa molecular de Neorickettsia risticii em trematódeos e moluscos em região com evidência sorológica do agente em equinos, estado do Rio de Janeiro

In Brazil, some studies have indicated that Neorickettsia risticii circulates in horses, but it is unclear which are the possible intermediate vectors of this bacterium in the country. The aim of this study was to use molecular techniques in order to analyze the presence of N. risticii in snails and larval stages of trematodes in farms in a region with a history of seroreactive horses towards this bacterium, in Rio de Janeiro, Brazil. Convenience sampling was used in the studied region. The collected snails were exposed to incandescent light (60W) for 2-4 hours in order to investigate trematodes in larval forms. Deoxyribonucleic acid (DNA) was extracted from snail tissue and trematode. Real-time PCR (qPCR) technique was used to investigate the presence of a 16S rRNA gene fragment of N. risticii. Snail specimens (n=410) were collected from 11 horse-breeding farms, and the following species were identified: Melanoides tuberculata, Pomacea sp., Biomphalaria tenagophila, Physa acuta, Drepanotrema anatinum and Biomphalaria straminea. Only 3.17% (n=13/410) of the collected snails were infected by trematodes. The cercariae obtained from these snails were classified as Megalourous cercariae, Pleurolophocercus cercariae and Furcocercous cercariae. There was no amplification of the target DNA of N. risticii in the snail and trematode samples tested by qPCR. Based on these data, the transmission of N. risticii by trematodes using these snail species in this region does not appear to occur or occurs at very low rates. Thus, further studies are needed in order to clarify which species of invertebrate hosts are infected by this bacterium and potentially participate in the transmission chain of equine neorickettsiosis in the state of Rio de Janeiro, Brazil.(AU)

No Brasil, estudos apontam a circulação de Neorickettsia risticii em equinos, contudo não estão claros quais os possíveis vetores intermediários dessa bactéria no país. O objetivo do presente estudo foi analisar a presença de N. risticii, utilizando-se técnicas moleculares, em caramujos e estágios larvais de trematódeos em propriedades rurais de uma região com histórico de equinos sororreativos para essa bactéria, no Rio de Janeiro, Brasil. Uma amostragem por conveniência foi utilizada na região de estudo. Os caramujos coletados foram expostos à luz incandescente (60W) durante duas-quatro horas para a investigação de trematódeos nas formas larvais. A extração de ácido desoxirribonucleico (DNA) foi realizada em tecidos de caramujos e trematódeos. A técnica de PCR em tempo real (qPCR) foi utilizada para investigar a presença de um fragmento do gene 16S rRNA de N. risticii. Foram coletados 410 espécimes de caramujos de 11 propriedades com criações de equinos, sendo identificadas as seguintes espécies: Melanoides tuberculata, Pomacea sp., Biomphalaria tenagophila, Physa acuta, Drepanotrema anatinum e Biomphalaria straminea. Apenas 3,17% (n=13/410) dos caramujos identificados estavam infectados por trematódeos. As cercárias obtidas desses caramujos foram classificadas em Megalourous cercariae, Pleurolophocercus cercariae e Furcocercous cercariae. Não foi observada a amplificação do DNA-alvo de N. risticii, por meio da qPCR, em nenhuma das amostras de caramujos e trematódeos testadas. Com base nesses dados, a transmissão de N. risticii por trematódeos que utilizam as espécies de caramujos nessa região parece não ocorrer ou ocorre a taxas muito reduzidas. Portanto, novos estudos são necessários para elucidar quais espécies de hospedeiros invertebrados se infectam por essa bactéria e potencialmente participam da cadeia de transmissão da neorickettsiose equina no estado do Rio de Janeiro, Brasil.(AU)

Observação in vitro da ação dos fungos nematòfagos Duddingtonia flagrans, Monacrosporium thaumasium e Pochonia chlamydosporia sobre ovos de Eurytrema coelomaticum / In vitro evaluation of the action of the nematophagous fungi Duddingtonia flagrans, Monacrosporium thaumasium and Pochonia chlamydosporia on Eurytrema coelomaticum eggs

Objetivou-se a observação in vitro da ação dos fungos nematófagos Duddingtonia flagrans (AC001), Monacrosporium thaumasium (NF 34) e Pochonia chlamydosporia (VC1 e VC4) sobre ovos de Eurytrema coelomaticum. Os ovos foram vertidos em superfície de ágar-água 2 por cento contendo os isolados fúngicos e em AA 2 por cento sem fungo como controle. Ao completarem sete, 10 e 14 dias, aproximadamente os ovos foram removidos e classificados de acordo com os seguintes parâmetros: efeito tipo 1, efeito lítico sem prejuízo morfológico a casca do ovo; tipo 2, efeito lítico com alteração morfológica da casca e embrião e tipo 3, efeito lítico com alteração morfológica do embrião e da casca, além de penetração de hifas e colonização interna do ovo. Os isolados AC001 e NF34 não demonstraram percentuais para o efeito do tipo 3, contudo o isolado VC1 apresentou resultados percentuais para o efeitodo tipo 3 que determinam a atividade ovicida de um fungo: 27,2 por cento aos sete dias, 23,1 por cento aos 10dias e 25,0 por cento aos 14 dias. Da mesma forma que isolado VC4 apresentou: 15,0 por cento aos sete dias, 25,4 por cento aos 10 dias e 21,8 por cento aos 14 dias respectivamente. Pochonia chlamydosporia é um fungo promissor que pode ser usado no controle biológico de E. coelomaticum.

The present study assessed in vitro action of nematophagous fungi species Duddingtonia flagrans (AC 001), Monacrosporium thaumasium (NF 34) and Pochonia chlamydosporia (VC1 and VC4) on eggs of Eurytrema coelomaticum. Eggs were placed on Petri dishes with fungus isolate grown in water- agar 2 percent and in the control (no fungus). After seven, 10 and 14 days, the eggs were removed and classified according to the following parameters: type 1, lytic effect without morphological damage to eggshell; type 2, lytic effect with morphological alteration of embryo and eggshell; and type 3, lytic effect with morphological alteration of embryo and eggshell, besides hyphal penetration and internal egg colonization. The isolate AC001 andNF34 had not demonstrated percentages to type 3 effects, however isolated VC1 presented results percentages for the type 3 effect that it determines the ovicida activity of one fungus: 27.2 percent to the seven days, 23.1 percent to the 10 days and 25.0 percent to the 14 days. The isolated VC4 presented: 15.0 percent to the seven days, 25.4 percent to the 10 days and, 21.8 percentto the 14 days. P. chlamydosporia is a promising fungus can be used in the biological control of E. coelomaticum.